【检验原理】
蛋白胨、酵母膏粉提供碳氮源和微量元素;氯化钠维持均衡的渗透压;琼脂是培养基的凝固剂;色素与单增李斯特氏菌具有的酶发生特异性反应,水解底物,释放出显色基团,在平板上,单增李斯特氏菌呈现绿~蓝绿色的光滑规则的小菌落;抑制剂和配套试剂可抑制杂菌的生长。
【单增李斯特显色培养基配方成分】
配方(每升) | 含量 |
蛋白胨 | 15.0g |
酵母膏粉 | 5.0g |
琼脂 | 15.0g |
氯化钠 | 5.0g |
色素 | 2.3g |
抑制剂 | 5.0g |
去离子水(平板) | 1000ml |
终pH 7.1±0.2(25℃)
【使用方法】
1.称取单增李斯特显色培养基干粉47.3g,加入蒸馏水或去离子水1 L,搅拌加热煮沸至*溶解,分装三角瓶,充分溶解,121℃高压灭菌15min,冷至50℃左右。
2.取10支配套试剂分别加入1mL无菌水,使之*溶解。
3.将配套试剂加入到已冷至48℃左右基础培养基中,充分混匀后倾注无菌平皿。
4.按国家标准、SN标准、FDA标准或其它方法制备样品液,进行增菌培养后,用接种环取1环增菌液,划线接种于显色平板上,置于36±1℃培养24-48小时。
5.观察结果。致病性李斯特24h后开始出现蓝绿色,至36~48h蓝绿色明显。挑取显色平板上呈蓝绿色光滑规则,直径约1~2mm的可疑单菌落进行进一步的试验。
6.对疑似单增李斯特氏菌菌落可使用HK-MID Listeria或API20E或生化管进行下一步的鉴定。
注:如产品类型为干粉,按上述1-6进行操作;若为即用型平板,按4-6进行操作即可。
【质量控制】
1.外观方面
干粉基础:流动性良好的淡黄色粉末。配套试剂:淡黄色冻干粉。
制备好平板:淡黄色不透明凝胶。
2.生物学方面
接种单增李斯特氏菌显色培养基后于36±1℃培养24-48h
【储存条件及保质期】
干粉培养基:2~8℃避光保存,用后立即旋紧瓶盖。贮存期两年。
配套试剂:2~8℃避光保存。贮存期两年。
即用型平板:2~8℃避光保存,多一周。
【注意事项】
1、称量时注意粉尘,避免引起呼吸道系统不适。
2、干粉培养基使用后立即旋紧瓶盖,避免吸潮结块。
3、自制平板时需注意培养基的厚度,厚度过薄容易造成琼脂水分保持性下降,开裂;因此,一般需要15-20mL(Φ90mm)体积培养基,平板培养基厚度至少为2mm。
4、即用型成品平板应该尽量保持在2-8℃下保存且与存放容器冷凝管保持一定距离以避免冻损坏。产品多次在低温与常温之间变更会引起琼脂的泌水,属于正常现象。使用前应平衡至室温且尽量在无菌干燥箱中预干燥。
5、质检报告可以登录环凯网站,打开“客服中心”页面,输入产品批号下载。
【废物处理】
检测之后带菌平板置于121℃下高压灭菌30分钟后处理。
【执行标准】
Q/HKSJ 03 普通微生物培养基
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